島津二維液相色譜新應(yīng)用|流動相含離子對試劑的化藥雜質(zhì)質(zhì)譜鑒定方法

離子對試劑：極性藥物分析繞不開的話題

液相色譜是藥物雜質(zhì)含量測定和有關(guān)物質(zhì)分離分析常用的技術(shù)手段。對一個陌生的化合物，ODS反相色譜柱通常方法開發(fā)條件會選擇酸性pH流動相。然而，總有些化合物，它們或含氨基、或含羧基、磺酸基團(tuán)、磷酸基團(tuán)，極性較強(qiáng)在反相色譜柱上沒有保留。打開2020版《中國藥典》第二部，不難發(fā)現(xiàn)這些品種，名稱中常含有“馬拉酸”、“鹽酸”、“堿”、“酸”等關(guān)鍵詞。對于這類強(qiáng)極性化合物的分析，藥典給出的答案是：流動相中添加離子對試劑。例如丁溴東莨菪堿、貝敏偽麻的有關(guān)物質(zhì)流動相條件中含有十二烷基硫酸鈉；馬來酸曲美布汀的流動相含有戊烷磺酸鈉；鹽酸頭孢吡肟的流動相含有辛烷磺酸鈉；葉酸、頭孢美唑和對氨基水楊酸鈉的流動相含有四丁基氫氧化銨。離子對試劑的添加，增強(qiáng)了極性化合物的保留，改善了藥物與雜質(zhì)的分離，是極性藥物分析的殺手锏。

離子對試劑：“質(zhì)譜不能承受之重”

辛烷磺酸鈉和四丁基硫酸氫銨等常用離子對試劑，屬于不揮發(fā)鹽類，質(zhì)譜響應(yīng)強(qiáng)且信號經(jīng)久不衰，持續(xù)抑制目標(biāo)化合物的電離。一旦誤操作進(jìn)入質(zhì)譜端，需要清洗整個離子通路才能恢復(fù)質(zhì)譜的正常狀態(tài)。常規(guī)二維液相在線除鹽系統(tǒng)僅能去除無機(jī)鹽，無法去除離子對試劑。這是因?yàn)闊o機(jī)鹽（如磷酸鹽）在二維反相色譜柱上無保留，在死時間將其切至廢液從而實(shí)現(xiàn)在線除鹽。然而離子對試劑具有較強(qiáng)的疏水性，在常規(guī)ODS色譜柱上強(qiáng)烈吸附顯著拖尾，因此不能被常規(guī)二維液相系統(tǒng)去除。

ReDual：一款可以同時分離無機(jī)、有機(jī)、陰、陽離子的“神柱”

ReDual系列色譜柱，是離子交換反相混合鍵合相色譜柱，共分為三款：

下圖是采用ReDual AX-C18 (4.6 mm I. D. × 150 mm L., 5 μm)分析磷酸二氫鈉、四丁基硫酸氫銨和卡絡(luò)磺鈉混合樣品的色譜圖。該款色譜柱表面鍵合叔胺基團(tuán)，在pH 2-7范圍內(nèi)色譜柱表面帶陽離子。除疏水作用外，其對陰離子具有離子交換作用，對陽離子具有離子排斥作用。為分離極性類似的陽離子和陰離子型化合物提供了條件。下圖中四丁基氨根離子峰型對稱，不拖尾無殘留，可以通過閥切換導(dǎo)入廢液實(shí)現(xiàn)在線去除。

應(yīng)用案例：卡絡(luò)磺鈉參比制劑中雜質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定

本應(yīng)用采用常規(guī)中心切割二維液相系統(tǒng)，無需改造儀器；餾分轉(zhuǎn)移過程配有紫外檢測器監(jiān)控，不存在檢測盲區(qū)；離子對試劑的去除未使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿性試劑；方法耐用性好。一維使用C18反相色譜柱，流動相添加磷酸二氫鈉（含四丁基硫酸氫銨，pH 3.0）；二維使用ReDual AX-C18色譜柱，在線去除四丁基硫酸氫銨和磷酸二氫鈉，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)化合物的質(zhì)譜鑒定。

總結(jié)

島津特色中心切割二維色譜雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)，二維使用ReDual? AX-C18強(qiáng)陰離子交換反相混合鍵合相色譜柱，成功實(shí)現(xiàn)一維流動相中離子對試劑和無機(jī)鹽的在線去除，并對卡絡(luò)磺鈉參比制劑中未知雜質(zhì)進(jìn)行了質(zhì)譜鑒定。